د جینیاتي مطالعاتو د ترسره کولو په جریان کې، موږ ډیری وختونه د RNA ناکافي نمونو سره مخ کیږو، د بیلګې په توګه، د کوچنیو اناتومیکي شفاهي تومورونو مطالعې لپاره، حتی د واحد حجرو نمونې، او د ځانګړي جین تغیراتو نمونې چې په انساني حجرو کې په خورا ټیټه کچه لیکل شوي.البته، د COVID-19 ازموینې لپاره ، که سویبونه په سم ځای کې نه وي یا د نمونې اخیستو پرمهال کافي وخت نه وي ، نو د نمونې اندازه به خورا ټیټه وي ، له همدې امله د روغتیا او کورنۍ پلان کولو کمیسیون دوه ورځې دمخه راپورته شو او ازموینه تیره کړه، او که د نیوکلیک اسید نمونې شپږ نمونې نه وي اخیستې، تاسو کولی شئ راپور ورکړئ.
د ریجنټ حساسیت مهم دی ځکه چې موږ دا ستونزه یا هغه ستونزه لرو، نو موږ د RT-PCR حساسیت ښه کولو لپاره څه کولی شو؟
مخکې له دې چې موږ د ممکنه حلونو په اړه بحث وکړو، راځئ چې د وضعیت سره دوه لوی پیچلتیاوې ذکر کړو چې موږ یې یادونه وکړه.
تر ټولو لومړی، موږ د RNA د ضایع کیدو په اړه اندیښمن یو کله چې موږ زموږ په نمونه کې یوازې د څو حجرو نفوس لرو.که چیرې دودیز جلا کولو او پاکولو میتودونه وکارول شي، لکه د کالم میتود یا د نیوکلیک اسید باران میتود، ډیر احتمال شتون لري چې یو څو نمونې له لاسه ورکړي.یو حل دا دی چې د کیریر مالیکول اضافه کړئ، لکه tRNA، مګر بیا هم، هیڅ تضمین شتون نلري چې زموږ د بیا رغونې تجربه سمه ده.
نو ښه لاره څه ده؟د کرل شوي حجرو یا مایکرواناتومیکل نمونو لپاره یو ښه اختیار د مستقیم لیسز کارول دي.
نظر دا دی چې حجرې د 5 دقیقو لپاره وویشئ ، RNA په محلول کې خوشې کړئ ، بیا د 2 دقیقو لپاره عکس العمل ودروئ ، بیا لیسیټ مستقیم د ریورس لیږد عکس العمل ته اضافه کړئ ترڅو هیڅ RNA له لاسه ورنکړي ، او په پای کې پایله شوې cDNA مستقیم کېږدئ. په ریښتیني وخت عکس العمل کې.
مګر څه که د یو محدود پیل ټکي یا د هدف جین بیان لږ مقدار له امله، موږ کولی شو ټول RNA ریسایکل کړو او بیا هم د ریښتیني وخت ښه سیګنال ترلاسه کولو لپاره کافي ټیمپلیټونه چمتو نکړو؟
په دې حالت کې، د لوړولو دمخه ګام خورا ګټور کیدی شي.
لاندې یو سکیم دی چې د ریورس لیږد وروسته حساسیت زیات کړي.د پیل کولو دمخه، موږ اړتیا لرو چې د زیرمې څخه وپوښتو چې کوم هدفونه چې موږ یې لیوالتیا لرو، د دې هدفونو لپاره ځانګړي پرائمرونه ډیزاین کړئ د مخکې پراخولو لپاره.
دا تر 100 جوړه پریمرونو او د 10 څخه تر 14 ځله د عکس العمل دورې سره د مخلوط پریمر رامینځته کولو سره ترلاسه کیدی شي.له همدې امله، یو ماسټر مکس په ځانګړې توګه د دې اړتیا لپاره ډیزاین شوی ترڅو ترلاسه شوي cDNA مخکې له مخکې پراخ کړي.
د 10 او 14 ترمنځ د سایکلونو د شمیر ټاکلو دلیل دا دی چې دا محدود شمیر دورې د مختلفو اهدافو تر مینځ تصادفي تضمین کوي، کوم چې د څیړونکو لپاره خورا مهم دی چې د کمیتي مالیکولر معلوماتو ته اړتیا لري.
د پری امپلیفیکیشن وروسته، موږ کولی شو د cDNA لوی مقدار ترلاسه کړو، ترڅو د شا په پای کې د کشف حساسیت خورا ښه شي، او موږ حتی کولی شو نمونه کمه کړو او د احتمالي تصادفي غلطیو د له منځه وړلو لپاره ډیری ریښتیني وخت PCR عکس العملونه ترسره کړو.
د پوسټ وخت: اپریل 11-2023